Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展平稳的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身血清到消失1改型癌症药理学症状的成效领军在学童时期就有较好的说明了，多个口内自身血清特征性的学童里面有70%在血清转化后10年内患病癌症，而随访15年的学童这一数目缩减到84%。比起之下，占药理学1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的得病组态还很难获取充分的研究成果。

更加多的人开始可用应于三子系统来假定1改型癌症的成效：个基底在消失多种口内自身血清时带入第1收尾，消失血压异常时带入第2收尾，消失症状时带入第3收尾。一些多发口内自身血清特征性的个基底，在1期和2期，成效较快，并发展为得病的1改型癌症。我们早先说明了了除此以外在首次验证到多种口内自身血清样品后仅仅10年无癌症的极慢成效者，这组病征人数少，但特征非常一致。随后，我们发现口内自身肝细胞特异性CD8+T巨噬细胞中间基底在成效加速的病征里面整基底不存在，但在近期得病和值得注意的癌症病征里面很难以验证到。这或许说明，与成效病征比起，这些病征自身免疫中间基底的调节增强。

以前研究成果说明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但癌症病征存在一些功能毛病，其里面还包括对IL-2的中间基底技能增高。此外，癌症病征里面的畸变CD4+T巨噬细胞或许对调节更为重要抵抗性，表现为畸变T巨噬细胞的消除减弱，自然环境产生的Treg和基底外产生的诱导Treg，以及肝细胞经历的CD4+T巨噬细胞里面IL-2中间基底减弱。本研究成果的意在是说明了了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在这群人极加速成效者里面的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的平行研究成果，在21岁以下确诊的病征直系亲属里面检查1改型癌症的危险状况。我们早先说明了了长期加速成效者的特征，他们始终保持多重口内自身血清特征性大约10年，但很难消失癌症的药理学症状，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续始终保持无癌症并想要提供者大量血液样品的加速成效者纳入T和B巨噬细胞功能比对。在目前的研究成果里面，8名慢成效者(SP组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的口内自身血清特征性。所有的举例来说都处于1改型癌症成效的1期，尽管一些人随后得不到了口内自身血清对某些肝细胞的特征性中间基底，然而，一名病征早就处于2期仅仅6年，但很难消失药理学症状，一名病征被诊断为癌症，该病人72岁，在通过观察试验中样品时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据比对里面对该NAD进行时了之外评估。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，运用于多参数流式巨噬细胞心法和T巨噬细胞消除试验评估NAD里面Treg的频带、环境因素和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、也就是说和重回)进行时无监督聚类比对，评估Treg环境因素。

结果：与生能活品质NAD比起，来自慢成效基底的潜意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类标示出新，作用于的潜意识CD4+ Treg频带缩减，与组胺诱导的TNFR涉及复合物(GITR)强调缩减有关。一名HbA1c急剧下降的病征与成效加速者和匹配的对照组比起，Treg谱相同。功能比对说明，与生能活品质NAD比起，来自加速成效基底的Treg诱导的CD4+畸变T巨噬细胞消除明显受损。表现为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134强调的消除缩减。

上图1 全面性的环境因素比对标示出新，CD4+Treg亚改型在慢成效描述符里面缩减。由FlowSOM分解的Treg四楼，聚集地在来自所有NAD的能活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示出新物强调断定出新10个元簇:潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)可用9个多种不同Treg标示出新分解的10个元簇的MST。每个节点亦然一个一个大(100个一个大)，更多的元一个大(10个元一个大)在节点组周围上色。每个节点里面的饼上图回应单个标示出新的强调级别。(b)每个元聚类的热上图，以标示出新整基底标示出新强调。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)分解上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)相对来说轻元素为每个metacluster装入直通上图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T巨噬细胞(l)。深紫色带三子亦然人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推记号秩核查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 可用CITRUS的预测模改型猜测，Treg频带的缩减是成效加速的标志。PG相关联(a - f)和甜菜比对(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的亦然性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR强调进行时分离，仿真FlowSOM群基底。(b) HD(网纹)和SP(斑点)组以及NADSP 606(深紫色)里面CD25+ cd127的频带汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联可数的装入直通上图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调数值制做，箭头突出新的簇被识别为SP和HD描述符错综复杂的多种不同。(j)装入直通上图标示出新了在SP(斑点)和HD(灰点)组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对来说轻元素(数目)。(k)直方上图标示出新每个簇的环境因素(黄色)和Treg标示出新相对来说强调与背景强调(紫色);上列，线程Treg_3;后面一行，线程Treg_4。背景与所有其他簇里面标示出新的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推记号秩核查

上图3 与生能活品质献血者比起，成效加速者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T巨噬细胞元簇(潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个强调标示出新的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的强调热上图(sp606不还包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深紫色)的FlowSOM GITR强调串联，标示出新直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon类推记号秩和核查，p< 0.07(深紫色)所有NAD还包括，p< 0.05(紫色)NADSP 606和匹配的HD不还包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR强调，从PG相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深紫色)串联，标示出新直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推记号秩核查

上图4 来自加速成效的CD4+ treg巨噬细胞控制畸变CD4+T巨噬细胞的技能增高。SP组用紫色的直通和带三子回应，HD组用灰色的直通和带三子回应，深紫色的直通/带三子回应NADsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示出新为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，人才3天后进行时流式巨噬细胞心法验证。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说应的treg人才(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除一般而言。可用特征性对照(作用于的作出新中间基底巨噬细胞不含treg)计算消除一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 畸变CD4+T巨噬细胞对加速成效的T巨噬细胞诱导的消除更敏感。SP组用紫色的直通和带三子回应，HD组用灰色的直通和带三子回应，深紫色的直通/带三子回应NADsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示出新，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，人才3天后进行时流式巨噬细胞心法(CD25反染)和巨噬细胞因三子比对。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同人才。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除次之(b)。(c,d) CD25消除次之(c)和CD134消除次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们证明了的论点是，来自加速成效三子的诱导潜意识CD4+Treg在GITR强调里面获取了延展和比较丰富，强调了实质性研究成果Treg在1改型癌症风险个基底里面的表征的更进一步。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28