Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者令人满意缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来口内自身抗体到显现出来1M-肾病临床征状的的发展率在孩童一时期就有很好的阐述，多个口内自身抗体阳性的孩童之前有70%在血液转换后10年内患上肾病，而随访15年的孩童这一数量减低到84%。相比之下，占临床1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的复发机制还没有得到充分的科学研究。

日渐多的人开始运用于分期种系统来定义1M-肾病的的发展：有机体在显现出来多种口内自身抗体时转至第1期中，显现出来血糖异常时转至第2期中，显现出来征状时转至第3期中。一些多发口内自身抗体阳性的有机体，在1期和2期，的发展较慢，并转型为复发的1M-肾病。我们之前阐述了一第一组在首次侦测到多种口内自身抗体样本后有数10年无肾病的近乎慢的发展者，这第一组病患者人数少，但特征非常明确。随后，我们发现口内自身特异性特异性CD8+T终点站粒体重排在的发展较慢的病患者之前基本不依赖于，但在现阶段复发和长期依赖于的肾病病患者之前很容易侦测到。这似乎表明，与的发展病患者相比，这些病患者自身抗体的调节增强。

早期科学研究表明，尽管调节性T终点站粒体(Treg)数量正常，但肾病病患者依赖于一些功用缺陷，其之前以外对IL-2的重排并能降低。此外，肾病病患者之前的现像CD4+T终点站粒体似乎对调节更具抵抗性，乏善可陈为现像T终点站粒体的抑止减弱，自然转化成的Treg和体外转化成的抑止Treg，以及特异性亲身经历的CD4+T终点站粒体之前IL-2重排减弱。本科学研究的目的是阐述了CD4+调节性T终点站粒体(Treg)在一小群近乎较慢的发展者之前的特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下胃癌的病患者亲属之前检查1M-肾病的危险考量。我们之前阐述了长期较慢的发展者的特征，他们保持多重口内自身抗体阳性超过10年，但没有显现出来肾病的临床征状，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名一直保持无肾病并情愿给予大量肾脏样本的较慢的发展者纳入T和B终点站粒体功用种系统性。在现在的科学研究之前，8名慢的发展者(SP第一组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的口内自身抗体阳性。所有的与会者都东南面1M-肾病的发展的1期，尽管一些人随后挽回了口内自身抗体对某些特异性的阳性重排，然而，一名病患者已经东南面2期有数6年，但没有显现出来临床征状，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据种系统性之前对该NADPH同步进行了单独审计。复合外周血单个核终点站粒体(PBMCs)，选用多参数流式终点站粒体绝技和T终点站粒体抑止测试审计NADPH之前Treg的振幅、表M-和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和复出)同步进行无监督聚类种系统性，审计Treg表M-。

结果：与肥胖症NADPH相比，来自慢的发展体的梦境CD4+T终点站粒体的监督聚类推断，触发的梦境CD4+ Treg振幅减低，与抗生素抑止的TNFR相关抗原(GITR)理解减低有关。一名HbA1c上升的病患者与的发展较慢者和给定的对照第一组相比，Treg谱大同小异。功用种系统性表明，与肥胖症NADPH相比，来自较慢的发展体的Treg特异性的CD4+现像T终点站粒体抑止明显破损。乏善可陈为对现像CD4+T终点站粒体CD25和CD134理解的抑止减低。

三幅1 深入的表M-种系统性推断，CD4+Treg亚M-在慢的发展队列之前减低。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -终点站粒体上。根据标有物理解检验出10个元簇:梦境T终点站粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T终点站粒体;HLA-DR + GITR +梦境T终点站粒体;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)运用于9个不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个键值值得一提的是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值第一组周围上色。每个键值之前的饼三幅对此单个标有的理解行政级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整体标有理解。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)作用于三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说金属量为每个metacluster盒终点站三幅(金属量> 0.05%)确定为HD和SP第一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T终点站粒体(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T终点站粒体(l)。绿色圆圈值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 运用于CITRUS的预测模M-表明，Treg振幅的减低是的发展较慢的标志。PG门控(a - f)和柑橘种系统性(g-k)较为SP与会者和给定的HD与会者在CD4+CD45RA−T终点站粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的值得一提的是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行复合，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(星点)第一组以及NADPHSP 606(绿色)之前CD25+ cd127的振幅概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列彼此之间的不同。(j)盒终点站三幅推断了在SP(星点)和HD(灰点)第一组之前，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说金属量(数量)。(k)直方三幅推断每个簇的表M-(粉红色)和Treg标有相对来说理解与氛围理解(红色);上列，CPUTreg_3;上头几天后，CPUTreg_4。氛围与所有其他簇之前标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与肥胖症献血者相比，的发展较慢者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T终点站粒体元簇(梦境T终点站粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T终点站粒体;HLA-DR + GITR +梦境T终点站粒体;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个理解标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR理解串联，推断直方三幅(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADPH以外，p< 0.05(红色)NADPHSP 606和给定的HD不以外在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR理解，从PG门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(绿色)串联，推断直方三幅(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自较慢的发展的CD4+ treg终点站粒体控制现像CD4+T终点站粒体的并能降低。SP第一组用红色的终点站和圆圈对此，HD第一组用紫色的终点站和圆圈对此，绿色的终点站/圆圈对此NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体同步进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被标有为CFSE, Treg按观察的数量指示剂。用抗CD3 /28微珠还原终点站粒体，人才培养3天内同步进行流式终点站粒体绝技侦测。(a-d)与CD4+应将答者相对来说应将的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止一般而言。运用于阳性对照(触发的响应将终点站粒体不含treg)计算抑止一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差种系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

三幅5 现像CD4+T终点站粒体对较慢的发展的T终点站粒体还原的抑止更敏感。SP第一组用红色的终点站和圆圈对此，HD第一组用紫色的终点站和圆圈对此，绿色的终点站/圆圈对此NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T终点站粒体同步进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标有，treg按观察的数量指示剂。用抗CD3 /28微珠还原终点站粒体，人才培养3天内同步进行流式终点站粒体绝技(CD25反染)和终点站粒体因子种系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百份(b)。(c,d) CD25抑止百份(c)和CD134抑止百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养之前的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差种系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

假设：我们得出的假设是，来自较慢的发展子的还原梦境CD4+Treg在GITR理解之前得到了扩展和丰富，阐释了进一步科学研究Treg在1M-肾病高风险有机体之前的异质性的实质。

书名典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28